CHO細(xì)胞DNA殘留的主要來源

CHO細(xì)胞（中國倉鼠卵巢細(xì)胞）是生物制藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的宿主細(xì)胞之一，廣泛用于重組蛋白、單克隆抗體等生物制品的生產(chǎn)。CHO被廣泛應(yīng)用于抗體類藥物的生產(chǎn)，包括完整抗體、抗體片段等;也被廣泛用于生產(chǎn)多種重組蛋白疫苗，如乙型肝炎疫苗等。即使經(jīng)嚴(yán)格的純化和質(zhì)控，終產(chǎn)品仍可能殘留宿主細(xì)胞DNA，若殘留量超標(biāo)，可能引發(fā)免疫原性反應(yīng)、成瘤性風(fēng)險(xiǎn)等安全問題，需要在生產(chǎn)過程中去除來自宿主細(xì)胞的雜質(zhì)，盡可能排除宿主細(xì)胞殘留物質(zhì)如DNA對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響。

CHO細(xì)胞DNA殘留主要產(chǎn)生于細(xì)胞培養(yǎng)、收獲及后續(xù)純化工藝環(huán)節(jié)。

1）細(xì)胞裂解釋放在細(xì)胞培養(yǎng)后期，部分CHO細(xì)胞會(huì)發(fā)生自然裂解，細(xì)胞內(nèi)的基因組DNA釋放到培養(yǎng)液中，成為主要的DNA殘留來源。或者生物制品收獲過程的細(xì)胞產(chǎn)生機(jī)械損傷，增加DNA殘留量。

2）工藝環(huán)節(jié)攜帶即使經(jīng)過純化工藝的設(shè)備和用料攜帶殘留DNA。

3）死細(xì)胞碎片殘留死細(xì)胞雖未充分裂解，但仍可能在后續(xù)工藝中破碎，釋放出DNA.

藥典對(duì)于生物制品的DNA殘留有明確的規(guī)定，有的要求取純化產(chǎn)物或原液測定DNA殘留應(yīng)不高于10ng/劑，有些生物制品的要求更嚴(yán)格，達(dá)到了pg級(jí)別。因此需嚴(yán)格控制DNA殘留水平并建立可靠的殘留DNA檢測方法。

CHO細(xì)胞DNA殘留的常用檢測方法

目前針對(duì)CHO細(xì)胞DNA殘留的檢測方法，需滿足靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的要求。中國藥典3407中對(duì)DNA殘留檢測方法的描述包含三種：DNA探針雜交法、熒光染色法、定量PCR方法。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）法是基于PCR技術(shù)通過設(shè)計(jì)針對(duì)CHO細(xì)胞基因組序列的特異性引物和探針，利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增過程，實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA殘留量的定量分析。該方法的優(yōu)勢是：靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬、檢測時(shí)間較短（約2~4小時(shí)），熒光定量qPCR是目前生物制藥行業(yè)常用的DNA殘留檢測方法。

翼和研發(fā)了針對(duì)CHO宿主細(xì)胞DNA殘留的檢測試劑盒（CHO 100），是一款操作簡便、靈敏度高、結(jié)果直觀、特異性強(qiáng)的宿主DNA殘留量檢測試劑盒，為CHO細(xì)胞DNA殘留量的檢測提供可靠方法。翼和生物采用一套引物探針在FAM通道定量檢測樣品中CHO殘留DNA，另外一套引物探針在HEX通道檢測內(nèi)參DNA。該試劑盒提供了陰性對(duì)照，NCS對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以實(shí)現(xiàn)CHO宿主細(xì)胞DNA殘留量的檢測,整個(gè)檢測流程大概3小時(shí)。能夠快速、高效、高靈敏、高特異性的檢測生物制品中的CHO殘留DNA。